Experimentální metody studia obranné reakce rostlin
Jednotlivé úlohy cvičení jsou zaměřeny na zpracování kontrolních a stresovaných rostlinných vzorků a následné analýzy spektrofotometrickými, fluorimetrickými, elektroforetickými, histochemickými a molekulárně biologickými metodami:
- Zpracování zamraženého rostlinného materiálu (kontrolní rostliny a rostliny stresované působením abiotických stresových faktorů). Homogenizace, extrakce.
- Práce s rostlinnými buňkami. Stanovení životnosti a buněčné smrti při působení stresových faktorů – mikroskopie, spektrofotometrie.
- Lokalizace produkce reaktivních forem kyslíku a dusíku v rostlinných pletivech – fluorescenční mikroskopie.
- Histochemická lokalizace aktivity antioxidačních enzymů - mikroskopie.
- Spektrofotometrické stanovení aktivity antioxidačních enzymů (peroxidasy, askorbátperoxidasy a katalasy) a antioxidační kapacity s využitím multifunkčního readeru.
- Stanovení produkce heat shock proteinů v kontrolních a stresovaných rostlinách – SDS PAGE, Western blotting a následná imunodetekce.
- Analýza rozdílů mezi kontrolními a stresovanými rostlinami pomocí molekulárně biologických metod (PCR, qPCR).